کلونینگ و ساخت مولکول ag85b:fc?1 با ریکامبینیشن مولکول ag85b از باکتری مایکوباکتریوم توبرکلوزیس با مولکولfc?1 از igg انسانی جهت طراحی واکسن و روش های نوین تشخیصی

مقدمه : توبرکلوزیس (tb) یکی از مشکلات اصلی سلامت عمومی در جهان است. در حال حاضر تنها واکسن موجود برای آن یک سویه ضعیف شده bcg است. ولی کارایی این واکسن مورد تردید قرار گرفته است. بنابراین واکسن های موثرتر علیه tb مورد نیاز هستند. در حال حاضر، اجزای کمپلکس آنتی ژن 85 میاکوباکتریوم توبرکلوزیس (ag85a, ag85b,ag85c) به دلیل ترشحی و ایمنودامیننت بودن از آنتی ژن ها پروداکتیو نوید بخش برای ساخت واکسن محسوب می شوند و در بسیار از ترکیبات واکسن به کار رفته اند. مواد و روشها: برای ساخت ag85b:fc?1، ناحیه کد کننده ag85b از ژنوم مایکوباکتریوم توبرکلوزیس سویه cdc1551 به روش pcr تکثیر شد. جایگاه های برش آنزیمی برای آنزیم های محدودکننده noti و xbai از طریق پرایمرها وارد شد. آنتی ژن 85b در یک وکتور ta کلونینگ کلون سد و در باکتری اشرشیاکولی سویه dh5? ترانسفورم گردید. آنتی ژن 85b خالص شد سپس به داخل وکتور بیانی (pdr2ef1) کلون گردید به نحوی که با ژن کد کننده قطعه fc از ایمنوگلوبولین g1 انسانی در یک قالب خواندنی قرار گیرد. فیوژن پروتیین حاصل در وکتور بیانی به داخل سلول های یوکاریوتی تخمدان همستر چینی (cell line cho) ترانسفکت شد و در نهایت تولید پایدار فیوژن پروتیین ag85b:fc?1، در سلول های cho مهندسی شده با روش ایمونوفلورسانس (ifa)تأیید گردید. نتایج : نتایج تعیین توالی نشان داد که ag85b:fc?1 فاقد هر گونه خطا و یا موتاسیونی است و دو بخش پروتیینی در یک قالب خواندنی ترجمه می شوند. قطعه پپتیدی لینکر ما بین دو بخش پروتیینی دارای جایگاه برش برای فاکتور xa و اسید فرمیک می باشد. این ویژگی این امکان را می دهد که خواص ایمونوژنیک آنتی ژن 85b به تنهایی و یا ag85b:fc?1 را بتوان بصورت in vivo و یا in vitro بررسی کرد. قطعه fc در فیوژن پروتیین ریکامبیننت همچنین موجب می شود تا آنتی ژن به صورت اختصاصی توسط سلولهای عرضه کننده آنتی ژن برداشت شوند. نتایج ifa نشان داد که فیوژن پروتیین ag85b:fc?1 به خوبی در سلول های یوکاریوتی بیان گردیده است. نتیجه گیری : در حال حاضر میتوان فیوژن پروتیین ساخته شده از مایع رویی سلول های یوکاریوتی را با استفاده از کروماتوگرافی افینیتی (hitrap recombinant protein a column (amersham uk) و ژل فیلتراسیون روی ستون hiload 60/16 superdex 200 size exclusio خالص کرده و در یک مدل موشی مبتلا به توبرکلوزیس، فعالیت و ویژگی های آنرا مورد بررسی قرار داد. قطعه fc?1 پروتیین از طریق رسپتورهای خود و بطور اختصاصی به سطح سلول های عرضه کننده آنتی ژن اتصاف می یابد. هدف اصلی از این مطالعه نیز بررسی اثر هدایت ایمونوژن به داخل سلول های عرضه کننده آنتی ژن از این طبق می باشد.